一、分光光度計的原理 分光光度計使用一個可以產生多種波長的光源，通過一系列分光計產生特定波長的光源。光源通過被測樣品后，部分光源被吸收，計算出樣品的光吸收值，從而換算成樣品的濃度。樣品的吸光度與樣品的濃度成正比。用分光光度計測量的樣品必須是均勻的溶液，不能有沉淀。如有沉淀，應搖勻。

　　1.關系式

　　光通過被測物質的溶液時，被物質吸收的量與物質的濃度和液層的厚度(光程長度)成正比，關系如下:A=-lg(I/I)。)=-lgT=kLc其中:a為吸光度； 2.基本原則 我.是入射單色光的強度；I是透射的單色光強度；t是物質的透射比；k是摩爾吸收系數；l為被分析物質的光程，即比色皿的邊長c為物質的濃度，物質對光的選擇性吸收波長，對應的吸收系數為物質的物理常數。當某一純物質在一定條件下的吸收系數已知時，可以將樣品在相同條件下配制成溶液，測定其吸收，這樣就可以通過上式計算出樣品中該物質的含量。在可見光區，除了一些吸收光的物質外，許多物質本身是不吸收光的，但在一定條件下加入顯色劑或處理使其顯色后可以測定， 所以也叫比色分析。由于影響顯色深度的因素很多，且經常使用單色光純度差的儀器，因此在測定時應同時使用標準品或對照品。

　　二、實際應用操作

　　分光光度計是用分光光度法對物質進行定量和定性分析的儀器。另一方面，分光光度法通過測量物質在特定波長或一定波長范圍內的光吸收，對物質進行定性和定量分析。常用的波長范圍有:

　　(1)200 ~ 400納米的紫外區。

　　(2)400 ~ 760納米的可見光區。

　　(3)2.5 ~ 25微米的紅外區(以波數計為4000厘米-1 ~ 400厘米-1)。

　　使用的儀器有紫外分光光度計、可見分光光度計(或色度計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄的規定進行定期校準。單色光輻射通過被測物質的溶液時，被物質吸收的量與物質的濃度和液層的厚度(光程長度)成正比，關系如下:1 a = log-= ECLT其中a為吸光度；t是透光率；e為吸收系數，用(E1% 1cm)表示，即吸收換算成溶液濃度為1% (g/ml)，液層厚度為1cm的數值； c為100ml溶液中所含被測物質的重量，g(以干品或無水物質計算)；l是液體層的厚度，厘米。光的選擇性吸收波長和相應的吸收系數是材料的物理常數。當某一純物質在一定條件下的吸收系數已知時，可以將樣品在相同條件下配制成溶液，測定其吸收，這樣就可以通過上式計算出樣品中該物質的含量。在可見光區，許多物質本身除部分外不吸光，但可通過加入顯色劑或在一定條件下處理后進行測定，故又稱為比色分析。由于影響顯色深度的因素很多，且經常使用單色光純度差的儀器，因此， 測定時應同時使用標準品或對照品。

　　總結:

　　分光光度計已經成為現代分子生物學實驗室的常規儀器。它通常用于核酸、蛋白質和細菌生長濃度的定量。分光光度計使用一個可以產生多種波長的光源，通過一系列分光計，產生特定波長的光源。光線通過被測樣品后，部分光線被吸收，計算出樣品的吸收值，換算成樣品的濃度。樣品的吸光度與樣品的濃度成正比。

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